丹萸颗粒提高动物生命质量实验——对老年..
丹萸颗粒对一年龄小鼠生存率、生育能力、老化相关酶及代谢产物的影响(1)
1 实验目的
观察丹萸颗粒对一年龄小鼠生存率、生育能力、老化相关酶-SOD、老化代谢产物-MDA、脂褐素的影响。
2 实验材料
(1).受试药物: 丹萸颗粒(见2)
①维生素E胶丸, 西南药业股份有限公司, 批号930501。
②维生素C片, 四川乐山第三制药厂, 批号930703。
阳性药物选择依据: 维生素E和C的抗衰老作用原理为清除生物体内活性氧自由基和脂质过氧化物(LPO), 为本试验公认的阳性药物。药液配制方法: 灌胃前新鲜配制, 先将Vit C配成1.8%生理盐水混悬剂, 再用阿拉伯胶将Vit E 配成0.9%乳剂, 分别给每支小鼠按0.2ml/10g BW灌胃。
(3).实验动物
昆明种远交系, 选用繁殖群中的一年龄小鼠, 年龄10-12月, 体重55±10g, 雌(♀)雄(♂)兼用。符合一级实验用小鼠质量标准, 四川省医学实验动物管理委员会合格证书号第32号, 由四川省中药研究所实验动物研究室提供。
3 实验方法
(1).动物及分组
10-12月龄繁殖群小鼠200只, 在实验室常规饲养致小鼠龄均达一年以上。选健康小鼠146只, 其中雄性57只, 雌性89只。随机分为以下4组。
(a)对照组40只, 雌性23只, 雄性17只。每日灌服生理盐水。
(b)维生素E+C组35只, 雌性22只, 雄性13只, 灌服维生素E 180mg/(kg.d)+维生素C 360mg/(kg.d)。
(c)丹萸颗粒大剂量35只, 雌性22只, 雄性13只, 灌服丹萸颗粒12g(生药)/(kg.d)相当于临床剂16倍量。
(d)丹萸颗粒小剂量36只, 雌性22只, 雄性14只, 灌服丹萸颗粒3g(生药)/(kg.d)相当于临床剂4倍量。
(e)另取繁殖群青年雌孕鼠25只, 作生育能力对照用。
各组动物分组后, 二雌一雄合笼常规饲养, 每周交换雄鼠。雌鼠怀孕后分笼饲养, 生育后哺乳20天, 又继续合笼饲养。各组动物接受灌胃给药, 每日一次, 每周六次, 连续150天, 实际给药129次。给药一个月后开始观察以下指标。
(2).观察指标
(a)体重、体征: 每日观察小鼠给药后的行为、活动等体征变化, 每周测体重。
(b)存活率: 每日观察小鼠死亡、尽量在频死前解剖观察小鼠死因, 必要时病理切片。
(c)生育能力: 给药30天后观察各雌性鼠的生育能力, 记录受孕率、产仔数、哺乳仔、离乳仔、离乳率。
给药150天后, 活杀各组剩余动物, 进行下列指标观察。
(d)血液生化检查: 取血清用双缩脲法(3)测定总蛋白(TP)、溴甲酚绿法(3)测定白蛋白(ALB)、黄嘌呤(4-5)测定超氧歧化酶(SOD)、硫代巴比妥酸(TBA)比色法(6)测定丙二醛(MDA)。
(e)肝、脑组织内脂褐素检查: 取肝、脑组织10%福尔马林液固定, 常规石蜡包埋切片5μm, et 用Schmor's反应(Lillie's, 1965)(7)显示组织内脂褐素(切片面积约0.5×1cm)。脂褐素含量以光镜(10×16)观察结果半定量记分形成表示, 评分标准见表3。
表3 组织内脂褐素含量光镜评分标准
记分值 |
染 色 反 应 |
0 |
未见蓝黑色脂褐素颗粒 |
1 |
偶见散在的细微颗粒 |
2 |
易见的细微颗粒 |
3 |
较广泛分布的细颗粒 |
4 |
广泛分布的细颗粒部分组大深染 |
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