丹萸颗粒调节免疫功能研究——对鸡红细胞..
丹萸颗粒对鸡红细胞作免疫原所致小鼠溶血素抗体生成的影响[11-12]
1 实验目的
鸡红细胞免疫小鼠可使其淋巴细胞产生特异性抗SRBC抗体, 并释放至外周血。分出致敏动物的血清, 与鸡红细胞[15]一起孵育, 在补体参与下, 可产生溶血现象。致敏动物血清中溶血素含量可以通过溶血过程中释放血红蛋白量来测出, 而反映丹萸颗粒对体液免疫功能的影响。
2 实验材料
(1).受试药物: 丹萸颗粒, 同2。
(2).阳性对照药物: 人参皂甙, 同4.1, 选择依据同2.4[13-14]。
(3).工具药: 环磷酰胺, 同4.4。
(4).实验动物: 小白鼠, 同4.4。
(5).实验动物: 豚鼠200-250g, 雌雄兼用, 符合一级质量标准, 四川省医学实验动物管理委员会批文第24301039号, 四川省中药研究所实验动物研究室提供。
(6).Alsevers溶液, 同2.5。
(7).都氏试剂: 碳酸氢钠1.0g,氰化钾0.05g, 高铁氰化钾0.2g、蒸馏水1000ml。
(8).补体制备: 取3只豚鼠血清混合, -20℃保存, 临用时生理盐水稀释1: 10。
(9).鸡红细胞悬液制备, 同2.5, 红细胞终浓度为20万个/ml。
(10).比色计: 日本产, SHIMADZU, UV-730, U-3型, 波长540nm。
3 实验方法
3.1 分组给药及免疫
小鼠70只, 雌性, 20±2g, 随机均分为7组, 每组10只, 分别为:
(1)对照组 NS ig×8
(2)环磷酰胺 (CY) 25mg/(kg.d) ip×3(隔日给CY一次)。
(3)人参皂甙 200mg/(kg.d) ig×8, 同时给与CY与(2)同。
(4-6): 丹萸颗粒24、12、6g(生药)/(kg.d) ig×8同时给与CY与(2)同。
第(2-6)组于给药2天后腹腔注射鸡红细胞悬液0.2ml/鼠, 对照组同法用SRBC免疫, 免疫6日后, 眼眶取血进行溶血素测定。
3.2 溶血素测定
取小鼠全血离心分离血清, 生理盐水稀释500倍按下表进行实验。
表14
|
样品管 |
对照管 |
500倍稀释血清 |
1ml |
/ |
生理盐水 |
/ |
1ml |
鸡红细胞稀释液 |
0.5ml |
0.5ml |
1: 10月豚鼠血清稀释液 |
1ml |
1ml |
然后于37℃水浴中保温10分钟, 孵毕, 在冰浴上终止反应。用2000rpm离心10分钟, 取上清液1ml, 都氏试剂3ml于试管中同时取鸡红细胞稀释液0.25ml, 都氏试剂4ml于另一支试管内, 充分摇匀, 放置10分钟后, 于540nm比色, 以对照管作空白, 分别测定各管吸收度(OD)值。
3.3 计算: 按下列公式计算每只小鼠样品的半数溶血值HC50。
样品OD值
样品HC50=—————————————
鸡红细胞半数溶血OD值
给药组动物HC50值与对照组和CY组的HC50值用t检验来判断显著性。
4 实验结果
丹萸颗粒24g(生药)/(kg.d) ig×8能轻微抑制小鼠溶血素抗体生成, 其HC50下降16%, P<0.05。环磷酰胺25mg/(kg.d) ip×3, 能强烈抑制小鼠溶血素抗体生成, 其HC50下降70%, P<0.01。小鼠注射环磷酰胺后再给丹萸颗粒24、12、6g(生药)/(kg.d), ig×8, 均能一定程度对抗环磷酰按所致上述免疫抑制作用; 人参皂甙200mg/(kg.d) ig×8亦具有与丹萸颗粒相同的作用, 且更强一些。详见表15。
表15 丹萸颗粒对小鼠溶血素抗体生成的影响
NO |
组 别 |
剂 量g/(kg.d) |
途径 |
动物数 |
溶血素HC50(X±S) |
P值 | |
与对照比 |
与模型比 | ||||||
(1) |
对 照 |
NS×8 |
ig |
10 |
535.8±110.1 |
|
** |
(2) |
C Y |
0.025×3 |
ip |
10 |
162.4±29.7 |
** |
|
(3) |
人参皂甙 |
0.200×8 |
ig |
10 |
402.4±81.9 |
** |
** |
(+CY) |
0.025×3 |
ip | |||||
(4) |
丹萸颗粒 |
24×8 |
ig |
10 |
332.3±82.5 |
** |
** |
(+CY) |
0.025×3 |
ip | |||||
(5) |
丹萸颗粒 |
12×8 |
ig |
10 |
358.8±68.7 |
** |
** |
(+CY) |
0.025×3 |
ip | |||||
(6) |
丹萸颗粒 |
6×8 |
ig |
10 |
242.2±94.0 |
** |
* |
|
(+CY) |
0.025×3 |
ip |
注: 丹萸颗粒剂量 g(生药)/(kg.d), *P<0.05, **P<0.01。
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