中成药:洁尔阴泡腾片的质量标准研究
洁尔阴泡腾片的质量标准研究
周玲英,曹晓兰,白晓春
(四川恩威中医药研究所,四川 成都 610041)
关键词:洁尔阴泡腾片:苦参;黄柏;黄芩;栀子;栀子苷;TLC;HPLC
摘要:目的:建立洁尔阴泡腾片(蛇床子、艾叶、苦参、黄柏等)的质量标准,方法:用薄层色谱法对苦参、黄柏、黄芩、栀子进行定性鉴别;用高效液相色谱法测定栀子苷的含量。结果:薄层鉴别的色谱斑点清晰,阴性对照无干扰;含量测定的平均加样回收率为99%,RSD为1.6%。结论:本方法简单、易行、精密度高、重复性好,可用于洁尔阴泡腾片的质量控制。
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1518(2005)01-0034-03
Quality standard of Jieeryin Effervescent Tablets
ZHOU Ling-ying,CAO Xiao-lan,BAI Xiao-chun
(Sichuan Enwei Institute of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610041,China)
KEY WORDS:Jieeryin Effervescent Tablets;Radix Sophorae Flavescentis;Cortex Phellodendri;Radix Scutellariase;Fructus Gardeniae;geniposide;TLC;HPLC
ABSTRACT:AIM:To establish the quality stardard for Jieeryin Effervescent Tablets(Fructus Cnidii,Folium Artemisiae Argyi,Radix Sophorae Flavescentis,Cortex Phellodendri,etc.). METHODS:Radix Sophorae Flavescentis、Cortex Phellodendri、Radix Scutellariae and Fructus Gardeniae in Jieeryin Effervescent Tablets were identified by TLC. The content of geniposide was determined by HPLC. RESULTS:The average recovery was 99% and relative standard deviation was 1.6%. CONCLUSlON:The precision and reproducibility of the method are good. The method can be used for quality control of jieeryin Effervescent Tablets.
洁尔阴泡腾片系洁尔阴洗液的改剂产品,由蛇床子、艾叶、苦参、黄柏、栀子、黄芩和独活等14味中药材制成,具有清热燥湿、杀虫止痒的功能,主治妇女湿热带下,用于霉菌性、滴虫性及非特异性阴道炎。其主要成分的质控手段为高效液相色谱法测定栀子苷的含量,薄层色谱法鉴别苦参、黄柏、黄芩、栀子。
1 仪器与试药
Waters 515高效液相色谱仪,Waters 486检测器,77251手动进样器,Waters柱温箱,Chrom Tek色谱工作站。流动相用试剂:水(超纯),乙腈(色谱纯)。其它试剂:均为分析纯。苦参碱、盐酸小檗碱、黄芩苷和栀子苷:均为中国药品生物制品检定所提供的含量测定用对照品。洁尔阴泡腾片:成都恩威药业有限公司产品。缺味阴性对照:按处方分别配成相应的缺味处方药,模拟制剂工艺,加相应辅料制备。
2 定性分析
2.1 苦参的鉴别试验
取本品5片,研细,加乙醚30ml、浓氨试液4ml,摇匀,浸泡过夜,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。取苦参碱对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。另取缺苦参的阴性样品,同供试品溶液的制备方法,制成阴性对照溶液。吸取上述3种溶液各2μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以苯丙酮-醋酸乙酯-浓氨(2∶3∶4∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照色谱上无干扰(图1)。
图1 洁尔阴泡腾片苦参鉴别色谱
1、15 缺苦参;2 苦参;3 苦参碱;4~14 洁尔阴泡腾片
2.2 黄芩的鉴别试验
取本品3片,研细,加水10ml,待发泡停止后离心,分取上清液,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取黄芩对照药材0.5g,加甲醇5ml,超声处理15min,滤过,滤液浓缩至约1ml,作为对照药材溶液。再取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。另取缺黄芩的阴性样品,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。吸取上述4种溶液各5μl,分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的主斑点;在对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照色谱无干扰(图2)。
图2 洁尔阴泡腾片黄芩鉴别色谱
1~14 洁尔阴泡腾片;15 黄芩;16 黄芩苷;17 缺黄芩
2.3 栀子的鉴别试验
取栀子苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。另取缺栀子的阴性样品,同2.2项下的供试品溶液的制备方法,制成阴性对照溶掖,吸取2.2项下的供试品溶液与上述两种溶液各4μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香芦醛硫酸乙醇(1→10)溶液,加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与栀子苷对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照色谱无干扰(图3)。
图3 洁尔阴泡腾片栀子鉴别色谱
1~11 洁尔阴泡腾片;12 栀子;13 栀子苷;14 缺栀子
2.4 黄柏的鉴别试验
取2.2项下的供试品溶液,用甲醇稀释一倍,加入盐酸1滴,摇匀,作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.1g,加甲醇10ml、盐酸1滴,摇匀,超声处理15min,滤过,滤液作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液。另取缺黄柏的阴性样品,同供试品溶液的制备方法,制成阴性对照溶液。吸取上述4种溶液各2μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点,在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性对照色谱无干扰(图4)。
图4 洁尔阴泡腾片黄柏鉴别色谱
1 缺黄柏;2 关黄柏;3 川黄柏;4 盐酸小檗碱;5~15 洁尔阴泡腾片
3 定量分析
3.1 色谱条件 色谱柱:Inersil ODS-3(250mm×4.6mm),保护柱:Phenomenex C18,流动相:乙腈-水(15∶85),流速:1.0ml·min-1,检测波长:238nm,进样量:10μl。
3.2 溶液的制备
对照品溶液 精密称取栀子苷对照品适量,加甲醇使溶解并制成每1ml含0.0291mg的溶液,即得。
供试品溶液 取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于1片的重量),置50ml具塞锥形瓶中,精密加入流动相20ml,放置30min,摇匀,离心,取上清液用微膜滤过,即得。
3.3 阴性对照试验 取缺栀子阴性对照样品,同供试品溶液制备方法,制备成阴性对照溶液并测定。结果,阴性对照色谱在栀子苷色谱峰处无干扰。见图5。
图5 栀子苷对照品、洁尔阴泡腾片和阴性对照的HPLC色谱图
A:栀子苷对照品 B:洁尔阴泡腾片 C:缺栀子阴性对照
3.4 线性关系考察 精密吸取上述对照品溶液2.5,5.O,7.5,10.0,12.5,15.0μl,分别注入液相色谱仪,测定,得峰面积积分值。以栀子苷峰面积(A)对进样量(C)进行直线回归,回归方程为A=1423324C+132(r=O.9992)。表明栀子苷在0.07275~O.4365μg范围内,峰面积为基本过原点的直线。
3.5 栀子苷对照品溶液稳定性考察 将对照品溶液于室内放置,以新配制的对照品溶液为对照,测定存放30日的栀子苷对照品溶液。结果,其浓度基本稳定。
3.6 供试品溶液稳定性考察 按样品测定方法操作,同一供试品溶液于室温条件放置0,4,8和24h后,分别进样测定其浓度,结果,4次测定的RSD为2.0%。表明供试品溶液在24h内,稳定性良好。
3.7 精密度试验 对照品溶液连续等量进样5次,峰面积分别为261448、265354、265472、258205和265765,RSD=1.3%;供试品溶液连续等量进样5次,RSD为0.51%。表明精密度良好。
3.8 重复性试验 同一批供试品平行试验5次,按样品测定方法测定,结果分别为0.3123,0.3123,O.3263,O.3116,O.3132 mg/片,平均为0.315 mg/片,RSD为1.99%。表明重复性良好。
3.9 回收率试验 精密称取重复性试验供试品粉末适量,用梯度法精密加入一定量对照品溶液,按样品测定方法测定、计算加样回收率,重复3次。结果,平均回收率为99.0%,RSD为1.6%(见表1)。
表1 加样回收率试验结果
样品重 |
样品含 |
加入对 |
测得量 |
回收率 |
平均回 |
RSD |
0.3007 |
0.3157 |
0.1713 |
0.1695 |
98.9 |
99.0 |
1.6 |
0.2970 |
0.3119 |
0.1713 |
0.1773 |
97.8 | ||
0.2964 |
0.3112 |
0.1713 |
0.1644 |
96.0 | ||
0.2988 |
0.3137 |
0.3425 |
0.3459 |
101.0 | ||
0.2916 |
0.3062 |
0.3425 |
0.3618 |
101.0 | ||
0.2920 |
0.3066 |
0.3425 |
0.3420 |
99.9 | ||
0.2991 |
0.3141 |
0.5138 |
0.5075 |
98.8 | ||
0.3056 |
0.3209 |
0.5138 |
0.5113 |
99.5 | ||
0.2951 |
0.3099 |
0.5138 |
0.5043 |
98.2 |
3.10 样品测定
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
测定结果 测定20批生产药品,其结果见表2。
表2 洁尔阴泡腾片栀子苷含量测定结果
序号 |
批号 |
含量(mg·片-1) |
序号 |
批号 |
含量(mg·片-1) |
1 |
990101 |
0.397 |
11 |
991202 |
0.494 |
2 |
990102 |
0.461 |
12 |
000701 |
0.524 |
3 |
990302 |
0.396 |
13 |
001201 |
0.340 |
4 |
990303 |
0.317 |
14 |
001202 |
0.600 |
5 |
990305 |
0.400 |
15 |
010101 |
0.566 |
6 |
990401 |
0.370 |
16 |
010102 |
0.587 |
7 |
990501 |
0.440 |
17 |
010201 |
0.506 |
8 |
990601 |
0.441 |
18 |
010202 |
0.406 |
9 |
991102 |
0.365 |
19 |
010203 |
0.396 |
10 |
991201 |
0.492 |
20 |
010204 |
0.414 |
总平均 |
X(均值) |
0.446 |
标准差 |
s |
0.081 |
4 讨论
4.1 为简化操作,黄柏与栀子可以同板鉴别,先在紫外光灯下检视鉴别黄柏,再显色鉴别栀子,但因不同成分的含量不同,分离与显色的灵敏度不同,需注意调整点样浓度和操作技术,点样量大了黄柏分离不好,点样量小了栀子色斑太浅,不利于鉴别。故质量标准中各味药材采用单独鉴别。
4.2 按95.5%概率的平均值置信区间为x(均值)±2s制定含量限度,则含量下限为x(均值)-2s=0.446-2×O.081=O.284(mg·片-1),取其整数,则为0.30mg/片。考虑生药来源、生产及成品贮藏等情况,暂定洁尔阴泡腾片中栀子苷的含量每片应不低于0.30mg。
参考文献:
[1] 中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2000.
摘自《中成药(Chinese traditional Patent Medicine)》2005年1月 第27卷 第1期 Page34-37
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