福建医学院:洁尔阴体外抗阴道毛滴虫的效..
洁尔阴体外抗阴道毛滴虫的效果及其作用机制的研究
福建医学院 蔡蕙珍 陈文列 陈金富 钟秀容 郑 秀
摘要 5%的洁尔阴与虫体孵育5分钟,A株虫全死亡,B株少数活至60分钟,24小时虫体全消失。10%的洁尔阴与虫体孵育3分钟虫全死亡,10分钟虫体全消失。电镜观察,5%的洁尔阴与虫体孵育5分钟胞膜破损,细胞器呈空泡状或消失;孵育10分钟核膜破损、核质松散。
关键词 阴道 毛滴虫 电镜
洁尔阴由黄柏等中草药制成,具有清热、解毒、止痒等功效,已在妇科阴道炎中广泛应用,但药物对阴道毛滴虫杀灭作用的最佳浓度、作用时间及其作用机制等重要环节尚未见报道。作者对上述内容作了研究,取得了肯定的结果。
1 材料与方法
1.1 虫株 A、B两株从急性滴虫性阴道炎患者分泌物分离取得,置肝浸汤培养基于36土0.5℃下培养。从培养48小的的培养基底部吸取悬液于离心管,加入培养液,以1500rpm离心10分钟,再次以培养液洗涤,浓集的虫体9×107--1.1×10的8次方/0.2m1,注入各试验管。同时设不含药的对照组2管。
1.2 药物 成都恩威世亨制药有限公司生产的洁尔阴,批号910550,以其原液为100%的浓度,用培养液稀释成3%,5%,10%与20%等浓度,分装于试管各5ml。
甲硝唑 系武汉制药厂生产的原粉,以培养液稀释成每毫升含1,2,4及10ug等浓度,分装于试管各5ml。
1.3 实验观察与结果判断 实验观察在25摄氏度进行。虫体注入于不同浓度药物培养管,混匀,孵育3,5,10,15,30及60分钟时,再混匀各管培养液后分别吸取各管悬液于载玻片上,复上盖玻片,在高倍镜下观察50个虫体中存活虫致比例,有1-10个活虫为+、11-30个为++,31-50个为+++,虫体团缩不动、胞质呈颠粒状、胞膜破裂或虫体结构模核定为死虫“0”,无虫体为阴性“-”。各管继续解育至24-48小时,发现有虫体的,以血细胞计数器计数。发现仅有死虫的及阴性的管即转种于正常培养基中培养48小时,进一步判断虫体是否真正死亡。
1.4 电镜样品制备 培养48小时的虫体注入含5%的洁尔阴培养管及正常培养基试管中,分别孵育3,5,10及30分钟,离心成团后,经2.5%戊二醛及1%饿酸固定,常规脱水、包埋、切片与染色,在HU-12A电镜下观察。
2 结果
2.1 洁尔阴抗阴道毛滴虫的效果 3%浓度的洁尔阴对虫体的作用不明显,虫体的形态与活动相似于对照组,仅孵育48小时后每立方毫米的虫数2-3×108“较对照组4.4-5.3×109虫数稍少些。5%的洁尔阴作用3分钟后,A株虫体全部团缩变性不动,B株仍有少量活动虫体。作用24小时后,A、B两株4管全无虫体发现,说明5%的洁尔阴有肯定杀灭阴道毛滴虫的效果,其杀虫作用相当于甲硝唑ED50值2ug/m1。10%的浓度对虫体作用3分钟,虫体即全体团缩变性不动;作用5分钟,虫体呈空泡状或结构模糊;作用10分钟,未再发现有虫体,继续孵育并同时转种培养至48小时,均无虫体发现。20%的洁尔阴作用5分钟,虫体全部溶解、消失(见附表)。
药物 |
浓度 |
虫株 |
虫体与药物共同孵育时间(min或h) |
|
| |||||||
3' |
5' |
10' |
15' |
30' |
60' |
24h |
48h |
24h |
48h | |||
洁尔阴 |
3% |
A |
+++ |
+++ |
+++ |
+++ |
++ |
++ |
5×107/mm3 |
3×108/mm3 |
|
|
B |
+++ |
+++ |
+++ |
+++ |
++ |
++ |
4×107/mm3 |
2×108/mm3 |
|
| ||
5% |
A |
+ |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
- |
- |
- |
- | |
B |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
- | ||
10% |
A |
0 |
0 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- | |
B |
0 |
0 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- | ||
20% |
|
A |
0 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- | |
B |
0 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- | ||
甲硝唑 |
1ug/ml |
A |
+++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
1×107/mm3 |
+ |
|
|
B |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
1.2×107/mm3 |
+ |
|
| ||
2ug/ml |
A |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
- |
- |
- |
- | |
B |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
- |
- |
- |
- | ||
4ug/ml |
A |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
- |
- |
- |
- | |
B |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
- |
- |
- |
- | ||
10ug/ml |
A |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
- |
- |
- |
- | |
B |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
- |
- |
- |
- | ||
对照 |
A |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
2.4×108/mm3 |
5.3×107/mm3 |
| ||
B |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
++ |
2.1×108/mm3 |
4.4×109/mm3 |
|
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