动物长期毒性试验资料
目的:观察连续给丹芎颗粒剂对大鼠所产生的毒性反应及其症状及严重程度,毒副反应的靶器官及其恢复或发展的情况,为拟定人用安全剂量提供参考。
摘 要:给Wistar大鼠每日灌服丹芎颗粒剂100、50、10g(生药)/kg,相当于临床日用剂量的66.7、33.4和6.7倍,连续灌服13周,三 个给药组的大鼠与生理盐水对照组大鼠相比较,无论行为活动,体重增长,血液学检查、血液生化学检查,脏器系数与主要脏器的病理组织学检查,均无显著差异。
1 试验材料
1、丹芎颗粒剂:试验时使用尚未制粒的稠浸膏,系涤褐色稠状液体,每克浸膏相当于原生药2.85g;批号: 由四川恩威中医药研究所提供。
2、动物:Wistar大鼠,120-150g体重,由华西医科大学实验动物中心提供,健康一级标准,合格证号:川医动管009号。
2 实验方法
取 健康大鼠80只,按体重分性别分为4组,每组20只,雌雄各半,1组为对照组,每日灌服生理盐水,2-4组分别灌服丹芎浸膏的相当100、50、 10g(生药)/kg(简称大、中、小剂量组),均连续灌服13周,每周称体重一次,并随体重增长调整给药剂量,给药期满后24小时,自各鼠眼眶静脉丛取 血作血液学〔红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)及分类、血红蛋白(Hb)、血小板计数(Pt)〕和血液生化学〔碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨 酶(GPT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总胆固醇(T-CHO)的测定,并各组活杀14只大鼠(雌、雄各 半),解剖,先以肉眼观察主要脏器有无病变,然后摘取脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、睾丸或子宫(含卵巢)称重,计算脏器系数,并切取以上脏器和胸腺、 胃、十二指肠一小块,置福尔马林液固定,石蜡包埋切片,HE染色,光镜观察。各组余下6只大鼠(雌雄各半)停药二周后活杀,以同样方法测定血液学、血液生 化学、脏器系数、脏器病理学检查。
3 试验结果
3.1 丹芎对大鼠体重增长的影响,观察结果见表3.1
表3.1 丹芎对大鼠体重增长的影响(g,X±SD)
称重时间 |
组 别 |
||||
对 照 |
大剂量 |
中剂量 |
小剂量 |
||
给药前(n=20) |
145.7±15.5 |
144.8±15.8 |
143.6±16.9 |
143.9±15.4 |
|
给 药 后
(周)
(n=20) |
1 |
176.4±22.5 |
168.4±19.8 |
173.7±17.8 |
172.2±26.6 |
2 |
176.4±22.5 |
196.3±25.0 |
196.4±23.8 |
193.0±28.4 |
|
3 |
193.8±25.8 |
223.6±30.3 |
224.2±25.5 |
215.4±37.4 |
|
4 |
220.2±33.5 |
225.6±14.3 |
233.1±32.0 |
222.0±31.1 |
|
5 |
228.8±39.3 |
248.2±34.7 |
254.8±27.1 |
243.1±38.5 |
|
6 |
249.1±37.8 |
259.8±36.5 |
264.4±38.8 |
262.0±43.6 |
|
7 |
279.6±45.3 |
265.4±34.6 |
271.4±34.8 |
275.1±48.5 |
|
8 |
283.0±46.9 |
277.1±42.0 |
287.6±37.8 |
285.2±50.2 |
|
9 |
290.5±48.4 |
281.7±41.4 |
294.8±39.6 |
292.2±52.7 |
|
10 |
295.2±48.9 |
289.9±45.5 |
297.7±39.9 |
295.4±51.4 |
|
11 |
300.3±49.4 |
290.6±49.5 |
301.6±42.7 |
299.8±48.6 |
|
12 |
299.0±52.9 |
294.4±45.3 |
300.4±45.2 |
299.7±46.9 |
|
13 |
310.0±54.1 |
300.4±48.4 |
302.0±39.9 |
300.8±45.4 |
|
停药二周(n=6) |
312.6±56.2 |
313.7±57.7 |
327.4±29.6 |
319.6±28.6 |
3.2 丹芎对大鼠血液学指标的影响见表3.2。
表3.2 丹芎对大鼠血液学指标的影响(X±SD)
|
组 别 |
||||
对 照 |
大剂量 |
中剂量 |
小剂量 |
||
给药13周(n=20) |
|
|
|
|
|
RBC(×1012/L) |
7.44±0.79 |
6.82±0.89 |
7.44±0.81 |
7.32±1.00 |
|
Hb(g/L) |
143.2±4.4 |
135.6±11.74 |
135.8±8.78 |
143.4±10.33 |
|
Pt(×109/L) |
736.0±82.36 |
718.4±95.11 |
765.7±109.5 |
732.5±79.97 |
|
WBC(×109/L) |
15.3±2.52 |
14.2±3.87 |
15.0±4.43 |
15.3±2.35 |
|
WBC分类(%) |
中性(N) |
19.8±3.59 |
21.8±3.42 |
21.6±4.80 |
21.1±2.86 |
淋巴(L) |
77.4±3.68 |
75.8±3.64 |
76.1±5.13 |
76.2±2.76 |
|
单核(M) |
0.95±0.51 |
0.80±0.52 |
0.85±0.67 |
1.05±0.60 |
|
嗜酸(E) |
1.80±0.77 |
1.60±0.69 |
1.65±0.67 |
1.70±0.73 |
|
停药2周(n=6) |
|
|
|
|
|
RBC(×1012/L) |
7.20±0.66 |
7.11±0.57 |
7.10±0.39 |
7.19±0.52 |
|
Hb(g/L) |
140.3±10.64 |
134.9±8.10 |
137.9±4.15 |
141.0±11.12 |
|
Pt(×109/L) |
762.3±185.1 |
762.0±117.2 |
740.0±127.1 |
741.7±160.1 |
|
WBC(×109/L) |
16.0±1.70 |
16.1±2.06 |
16.4±2.71 |
16.0±1.97 |
|
WBC分类(%) |
中性(N) |
21.6±3.6 |
21.1±3.6 |
21.4±4.09 |
22.3±4.69 |
淋巴(L) |
75.7±3.83 |
76.1±3.57 |
75.9±4.33 |
74.9±4.84 |
|
单核(M) |
0.90±0.79 |
0.90±0.74 |
0.82±0.63 |
1.00±0.47 |
|
嗜酸(E) |
1.80±0.79 |
1.80±0.79 |
1.80±0.63 |
1.80±0.79 |
3.3 丹芎对大鼠血液生化指标的影响,见表3.3。
表3.3 丹芎对大鼠血液生化指标的影响(X±SD)
|
组 别 |
|||
对 照 |
大剂量 |
中剂量 |
小剂量 |
|
给药13周(n=20) |
|
|
|
|
APL(u) |
43.6±13.3 |
42.9±19.1 |
49.6±15.6 |
42.8±15.2 |
GPT(u) |
31.1±9.09 |
29.2±7.45 |
28.8±9.20 |
28.8±5.92 |
TP(g/L) |
59.3±5.71 |
58.5±5.04 |
56.3±5.70 |
58.3±6.35 |
ALB(g/L) |
35.7±3.12 |
37.5±2.56 |
36.6±3.39 |
35.8±3.09 |
BUN(mmol/L) |
3.00±0.96 |
2.89±0.84 |
3.38±1.36 |
3.15±0.66 |
Cr(μmol/L) |
71.6±32.2 |
71.6±32.2 |
67.2±39.6 |
73.9±42.2 |
T-CHO(mg/dl) |
1.46±0.30 |
1.36±0.38 |
1.31±0.35 |
1.47±0.28 |
停药2周(n=6) |
|
|
|
|
APL(u) |
38.7±9.79 |
35.6±8.29 |
35.6±11.8 |
36.3±8.24 |
GPT(u) |
28.3±5.55 |
28.8±3.84 |
29.0±4.38 |
29.1±4.01 |
TP(g/L) |
61.7±5.36 |
61.3±5.95 |
61.6±5.78 |
60.4±4.47 |
ALB(g/L) |
36.0±2.32 |
36.1±2.92 |
36.3±3.21 |
35.9±2.74 |
BUN(mmol/L) |
3.57±1.10 |
3.33±1.08 |
3.11±0.74 |
3.44±0.92 |
Cr(μmol/L) |
66.7±30.1 |
70.8±30.1 |
68.2±29.5 |
72.9±32.9 |
T-CHO(mg/dl) |
1.61±0.33 |
1.58±0.34 |
1.62±0.33 |
1.66±0.28 |
3.4 丹芎对大鼠脏器系数的影响,见表3.4。
表3.4 丹芎对大鼠脏器系数的影响(g/100g,X±SD)
|
组 别 |
|||
|
对 照 |
大剂量 |
中剂量 |
小剂量 |
给药13周(n=14) |
|
|
|
|
心 |
0.29±0.02 |
0.29±0.01 |
0.30±0.03 |
0.30±0.04 |
肝 |
2.70±0.44 |
3.02±0.25 |
3.02±0.38 |
2.90±0.27 |
脾 |
0.36±0.07 |
0.37±0.10 |
0.41±0.09 |
0.37±0.07 |
肺 |
0.60±0.04 |
0.62±0.10 |
0.64±0.08 |
0.62±0.07 |
肾 |
0.63±0.05 |
0.66±0.06 |
0.66±0.06 |
0.66±0.06 |
肾上腺(×10-2) |
1.7±0.5 |
1.7±0.6 |
2.0±1.0 |
1.8±0.7 |
脑 |
0.55±0.12 |
0.56±0.11 |
0.59±0.07 |
0.59±0.07 |
睾丸(n=7) |
0.39±0.11 |
0.38±0.05 |
0.39±0.05 |
0.40±0.04 |
子宫卵巢(n=7) |
0.25±0.05 |
0.22±0.07 |
0.22±0.05 |
0.24±0.04 |
给药2周(n=6) |
|
|
|
|
心 |
0.30±0.02 |
0.29±0.02 |
0.29±0.02 |
0.30±0.03 |
肝 |
3.34±0.27 |
3.46±0.30 |
3.31±0.21 |
3.33±0.39 |
脾 |
0.35±0.08 |
0.38±0.11 |
0.31±0.07 |
0.33±0.06 |
肺 |
0.67±0.1 |
0.72±0.15 |
0.61±0.07 |
0.62±0.06 |
肾 |
0.67±0.04 |
0.70±0.04 |
0.64±0.08 |
0.65±0.09 |
肾上腺(×10-2) |
1.8±0.5 |
1.8±0.6 |
1.6±0.5 |
1.6±0.4 |
脑 |
0.50±0.14 |
0.56±0.10 |
0.53±0.05 |
0.53±0.04 |
睾丸(n=3) |
0.49±0.14 |
0.43±0.24 |
0.44±0.24 |
0.46±0.17 |
子宫卵巢(n=3) |
0.23±0.03 |
0.30±0.08 |
0.26±0.16 |
0.22±0.04 |
3.5 丹芎对大鼠脏器病理组织学观察
给药13周大鼠主要脏器病理组织学观察如下:
心脏:各组动物心内、外膜完整,未见纤维组织增生和炎细胞浸润。
肝脏:各组动物肝小叶结构完整,肝细胞内及胆管内无胆汁淤滞,亦未见炎细胞浸润。
脾脏:T细胞区和B细胞区细胞数量未见减少,未见炎细胞浸润。
肺脏:各组动物肺无结缔组织增生,无炎细胞浸润,但给药组与对照组均有少数大鼠肺间质及支气管周围是多灶分布少量的中性白细胞、淋巴细胞及单核巨噬细胞浸润,部分间质轻度充血水肿,但给药组与对照组比较无明显差异性。
肾脏:各组动物肾被膜完整,未见结缔组织增生及炎性渗出,髓祥及集合管内未见细胞及蛋白管型。
脑、胸腺、肾上腺、胃、十二指肠、睾丸、子宫、卵巢组织学观察均未见异常病变。
停药2周后各组动物的上述脏器组织学观察均未见有明显的异常变化。
4 结论
丹芎给大鼠以100、50、10g(生药)/kg.d,连续13周以及停药2周大鼠的基本状况、血液学、血液生化学、脏器系数、脏器病理组织学观察等与对照组无显著差异,未发现有明显的毒副反应,此剂量已相当临床试用日剂量的66.7、33.4、6.7倍。
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