丹萸颗粒对大鼠长期毒性试验——摘要
丹萸颗粒对大鼠长期毒性试验
摘 要
丹萸颗粒对大鼠长期毒性。试验结果表明, 给大鼠灌服丹萸颗粒混悬液, 剂量分别50.0、25.0和12.5g(生药)/(kg.d)相当于临床剂量的65、33和16倍, 连续6个月后, 对大鼠的外观体征, 行为活动, 摄食饮水大小便, 体重, 心电图(Ⅱ导联), 血象(RBC、Hb、PLT、WBC+DC)、血液生化学(GLU、BUN、CREA、ALT、AST、ALP、TP、ALB)、病理解剖学检查均未见显著影响。经病理形态学检查, 对心、肝、肾、脾、肺等十一个脏器均未见药物性损伤。亦未见继发毒性反应。证明本制剂所标示的临床剂量安全无毒。
1 试验目的
观察丹萸颗粒对大白鼠长期连续重复给药对大鼠所产生的毒性反应, 首先出现的症状和严重程度毒副反应的靶器官及恢复和发展情况, 预测本品可能出现的质和量的毒性反应。为确定安全无毒剂量, 为拟定人用安全剂提供依据和参考。
2 受试药物
丹萸颗粒,四川恩威中医药研究所提供, 批号: 940221。
铝塑包装, 每包3g, 每g颗粒剂含生药量5g, 一日三次, 十五天为一疗程。
取丹萸颗粒于托盘扭力天平上的精确称量, 在乳钵内研细, 或者放入组织捣碎器内, 逐渐加入定量的生理盐水, 终浓度配制成25%、12.5%、6.25%的混悬剂, 大鼠灌胃容积2ml/100g BW, 置4℃冰箱保存备用, 使用前摇匀。
3 实验动物
3.1 Wistar种属远交品系大白鼠。符合一级实验用大鼠质量标准, 四川省医学实验动物管理委员会合格证书号第24301038号。四川省中药研究所实验动物研究室提供。
体重75±15g, 年龄 4-5周龄, 雄(♂)、雌(♀)各半, 120只, 均分为4组, 每组30只。
一级实验大鼠饲养饲料配方(%): 玉米粉20、小麦面25、麦麸20、黄豆粉11、鱼粉(含蛋白质55-80%)9、酵母粉2、骨粉2、鸡蛋、 鱼肝油0.5、多种维生素0.5、食盐1。粉碎、混匀制成颗粒。
3.2 实验环境: 设施级别一级, 四川省医学实验动物管理委员会批文医动字第2430301号, 实验室室温22±9℃。湿度60-70%。
4 试剂、药品及测试仪器
谷丙转氨酶测定试剂盒(赖氏法)批号940601; 谷草转氨酶测定试剂盒(赖氏法)批号940725; 总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)批号940720; 血清白蛋白测定试剂盒(溴甲酚绿法); 尿素氮测定试剂盒,批号940721; 血清硷性磷酸酶测定试剂盒(金氏单位法)批号940509; 血清肌酐测定试剂盒(苦味酸比色法)批号940701; 血清葡萄糖测定试剂盒(COD-POD法)批号940503, 以上试剂盒均为重庆医学检验试剂研究所生产。
测试仪器有: 比色计UV-730 U-3型日本SHIMADIU产; 心电图测定仪 SB-613D型日本光电株式会社产; 生物学显微镜Leitz Wetzlar DIALUX 德国产; 电子天平EB-3200D型日本SHIMADZU产; 扭力天平 中国上海第二天平仪器厂产。
5 试验方法
(1)给药途径与临床一致灌胃(ig)。
(2)剂量设计及周期: 120只大鼠随机分为4组, 每组30只, 雌雄各半。分别灌胃丹萸颗粒50.0、25.0、12.5g(生药)/(kg.d)和对照组灌服0.9% NS, 各组体积相等(2ml/100体重), 每日一次, 每周停药一日(星期日), 连续6个月。
(3)提供预试剂量及剂量设计依据: 小鼠急毒试验表明, 丹萸颗粒ig 200g(生药)/kg未出现毒性反应, 药效学试验表明, 常用剂量为24、12、6g(生药)/kg能出现药效学反应; 临床常用剂量为0.75g(生药)/(kg.d)。其大剂量超过临床剂量50倍, 其中剂量超过药效学大剂量。
(4)观察指标及时间: 大鼠给药期间, 每天观察动物死亡, 外观体征、行为活动、摄食、饮水、毛发、粪便、尿、分泌物、眼、耳、鼻等情况, 每周称体重一次, 按每鼠体重调整给药剂量。
所有动物于剖杀前作清醒动物心电图标准Ⅱ导联分析。
所有动物于剖杀前, 尾静脉采血作血液学指标检查: 红细胞计数(RBC)、白细胞计数和分类(WBC+DC)、血红蛋白测定(Hb)、血小板计数(PLT)。
给药六月后停药禁食, 次日取各组三分之二大鼠动脉放血, 分离血清, 作血液生化指标检查: 谷丙氨基转换酶(ALT), 谷草氨基转换酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)硷性磷酸酶(ALP)等。
活杀处死各组三分之二动物取脑、胸腺、心脏、肝脏、脾脏、肾上腺、肾脏、睾丸、子宫和卵巢称重, 计算脏器系数。并将上述器官加上肺脏、胃、十二指肠固定于10%福尔马林溶液, 石腊包埋、切片5μm, HE染色, 光镜观察, 作组织病理形态学检查。
(5)恢复性试验: 剩余三分之一大鼠, 每组10只, 雌雄各半, 停药观察一月, 按上述指标检查作恢复性试验观察。
(6)数据处理: 所有数据按生物统计学原则以各动物数(N)的均数加减标准差(X±SD)统计, X2和t测验计算组间显著性, P值计算设三档次, **示P<001; *示P<0.05; P>0.05不作表示, 检验水准α=0.05。
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