清经颗粒动物长期毒性试验
清经颗粒动物长期毒性试验
1 摘要
清经颗粒以每日48g(生药)/kg、24g(生药)/kg对大鼠连续灌胃60天,对动物外观体征、行为活动、体重增长、血液学指标、血液生化学指标及主要脏器的脏器系数均无明显影响,病理检查10种主要脏器,未见明显病理组织形态学改变,停药两周未发现改组性毒性反应。
2 目的
观察大鼠连续灌胃给予清经颗粒60天所产生的毒性反应及程度,毒副反应的靶器官及其恢复和发展情况,为拟定人用安全剂量提供参考。
3 材料
3.1 受试药物
清经颗粒:每粒装0.4g,相当于生药2g,四川恩威制药有限公司提供,批号960525。用蒸馏水配成2.66g(生药)/ml与1.33g(生药)/ml的混悬液的供实验用。
3.2 实验动物
健康SD大鼠,雌雄各半,6周龄,体重121.2±8.0g,四川省医学科学院医学实验动物中心提供,一级动物(合格证:医动字2410101号)
3.3 试剂
丙氨酸氨基转换酶(ALT)、咸性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、尿素氨(BUN)、肌酐(Crea)试剂盒均为四川迈克科技有限责任公司产品,批号分别为960428、951208、951220、960215、960201。固体BCG试剂(测定白蛋白ALB),上海荣盛生物试剂厂产品。
3.4 实验条件
饮料为鼠颗粒料,由华西医科大学实验动物中心提供,实验室室温18-24℃,相对湿度70-75%。本研究室实验条件设施合格证:川实动管第100号。
4 方法
取大鼠60只,在本室饲养观察1周后,按性别、体重随机分为3组,每组20只,雌雄各半。高、低剂量组分别为灌胃2.66、1.33g(生药)/ml的清经颗粒混悬液1.8ml/100g,相当于生药48、24g/kg(约分别为临床一日试用量的100倍、50倍),对照组灌服等容积蒸馏水,每日一次,连续给药60天,停药后继续观察14天。整个实验过程中,各组大鼠均自由进食、饮水。
观察指标及检测时间:每日观察大鼠的行为表现,每10天称一次体重,根据体重变化调整给药量。于实验结束时(停药后24小时),每组抽取12只大鼠(雌雄各半),自眼眶后血管丛取血作血液学、血液生化学指标检测。然后处死解剖,肉眼观察主要脏器、摘取并剥离心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、睾丸或子宫、卵巢,电子天平(感量0.1mg)称重,计算脏器系数,取上述脏器及胃组织各一块,甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色,进行病理组织学检查。停药后14天,各组余下动物同法作以上指标检查。
血液学与血液生化学指标检测方法:
红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PC)计数与血红蛋白(Hb)含量:日本东亚公司CC-180型电子血球仪测定。白细胞分类计数:常规镜栓。ALT,改良赖氏法;ALP,磷酸苯二钠法;TP,双缩腺法;ALB,溴甲酚绿法;BUN,二乙酰——肟法;Crea,碱性苦味酸法。
5 结果
5.1 一般状况
清经颗粒高、低剂量组及对照组大鼠在整个试验过程中,行为活动、进食、饮水、排便均正常,体毛致密光润,眼、耳、鼻、口腔无异常分泌物,无一只死亡。
5.2 对体重增长的影响
表1 清经颗粒给药期间及停药14天大鼠体重变化 (g,X±SD)
组别 |
剂量 |
动物数 |
给药前体重 |
给药期间体重增长值 |
停药14d | |||||
10 |
20 |
30 |
40 |
50 |
60(d) | |||||
对照 |
- |
20 |
121.6 |
48.8 |
77.0 |
98.4 |
117.8 |
135.8 |
150.9 |
167.4±75.3 |
清经颗粒 |
48 |
20 |
120.8 |
46.2 |
73.7 |
97.8 |
114.1 |
131.0 |
143.0 |
163.4±65.7 |
清经颗粒 |
24 |
20 |
121.4 |
48.4 |
73.0 |
95.5 |
115.2 |
136.3 |
149.9 |
169.0±79.1 |
组别 |
剂量 |
动物数 |
RBC |
Hb |
PC |
WBC |
WBC分类(%) | |||
(g生药/kg) |
(只) |
(1012/L) |
(g/L) |
(109/L) |
(109/L) |
N |
L |
M |
E | |
对照 |
- |
12 |
7.44±0.58 |
139.2±11.8 |
613.2±115.6 |
15.2±4.4 |
30.3±6.3 |
66.4±5.6 |
1.5±1.1 |
1.8±1.3 |
清经颗粒 |
48 |
12 |
7.29±0.71 |
137.8±8.3 |
657.2±121.1 |
16.1±3.4 |
27.5±8.4 |
69.5±8.4 |
1.2±0.9 |
1.8±1.1 |
清经颗粒 |
24 |
12 |
7.33±0.63 |
135.5±10.8 |
622.9±137.7 |
14.8±4.7 |
31.5±4.8 |
65.7±5.2 |
1.3±1.1 |
2.3±1.1 |
组别 |
剂量 |
动物数 |
RBC |
Hb |
PC |
WBC |
WBC分类(%) | |||
(g生药/kg) |
(只) |
(1012/L) |
(g/L) |
(109/L) |
(109/L) |
N |
L |
M |
E | |
对照 |
- |
8 |
7.34±0.47 |
147.0±7.8 |
643.1±116.0 |
12.9±3.4 |
34.5±10.1 |
62.0±9.7 |
1.5±1.5 |
2.0±1.3 |
清经颗粒 |
48 |
8 |
7.41±0.57 |
150.0±8.4 |
668.1±79.8 |
14.6±4.2 |
32.8±6.8 |
64.4±5.6 |
1.1±1.0 |
1.8±1.6 |
清经颗粒 |
24 |
8 |
7.60±0.54 |
149.3±8.9 |
694.1±102.9 |
15.3±3.3 |
30.5±7.1 |
66.5±8.0 |
1.5±1.6 |
1.5±1.7 |
组别 |
剂量 |
动物数 |
ALT |
ALP |
TP |
ALB |
BUN |
Crea |
(g生药)/kg |
(只) |
(u) |
(u) |
(g/L) |
(g/L) |
(mmol/L) |
(μmol/L) | |
对照 |
- |
12 |
39.1±5.6 |
56.8±21.7 |
70.7±6.6 |
39.7±4.7 |
7.1±0.9 |
58.2±7.8 |
清经颗粒 |
48 |
12 |
36.9±7.6 |
58.4±19.4 |
72.2±8.3 |
38.5±5.1 |
6.9±1.0 |
59.9±7.6 |
清经颗粒 |
24 |
12 |
37.0±8.0 |
53.9±17.6 |
68.6±6.3 |
37.4±4.7 |
7.5±0.9 |
63.0±8.0 |
组别 |
剂量 |
动物数 |
ALT |
ALP |
TP |
ALB |
BUN |
Crea |
(g生药)/kg |
(只) |
(u) |
(u) |
(g/L) |
(g/L) |
(mmol/L) |
(μmol/L) | |
对照 |
- |
8 |
33.4±9.2 |
56.8±21.7 |
70.7±6.6 |
39.7±4.7 |
7.1±0.9 |
58.2±7.8 |
清经颗粒 |
48 |
8 |
32.5±9.5 |
51.5±15.5 |
69.7±8.8 |
39.7±5.4 |
7.0±0.9 |
66.0±7.8 |
清经颗粒 |
24 |
8 |
35.4±7.1 |
54.8±16.6 |
67.7±8.7 |
39.5±5.3 |
7.2±0.7 |
66.8±9.9 |
组别 |
动物数 |
心 |
肝 |
脾 |
肺 |
肾 |
肾上腺 |
睾丸 |
子宫 |
卵巢 |
对照 |
12 |
0.3127±0.0225 |
3.7996±0.3532 |
0.5792±0.1201 |
0.6354±0.1269 |
0.7217±0.0843 |
0.0216±0.0069 |
0.8654±0.0749 |
0.2052±0.0202 |
0.0449±0.0054 |
清经颗粒大剂量 |
12 |
0.3093±0.0225 |
3.6495±0.4090 |
0.5432±0.0847 |
0.6438±0.1120 |
0.6790±0.0572 |
0.0228±0.0080 |
0.8570±0.0611 |
0.2008±0.0230 |
0.0468±0.0050 |
清经颗粒小剂量 |
12 |
0.3168±0.0154 |
3.6843±0.3258 |
0.5286±0.0726 |
0.6825±0.1100 |
0.7108±0.0645 |
0.0206±0.0064 |
0.8831±0.0764 |
0.1997±0.0250 |
0.4288±0.0060 |
组别 |
动物数 |
心 |
肝 |
脾 |
肺 |
肾 |
肾上腺 |
睾丸 |
子宫 |
卵巢 |
对照 |
8 |
0.3062±0.0287 |
3.6062±0.3862 |
0.5485±0.0798 |
0.6477±0.1869 |
0.6974±0.1126 |
0.0226±0.0064 |
0.8137±0.0764 |
0.1967±0.0373 |
0.0457±0.0051 |
清经颗粒大剂量 |
8 |
0.3146±0.0280 |
3.7970±0.3928 |
0.5263±0.0689 |
0.6346±0.0939 |
0.6824±0.0873 |
0.0219±0.0056 |
0.8085±0.0637 |
0.2173±0.0257 |
0.0424±0.0041 |
清经颗粒小剂量 |
8 |
0.3004±0.0246 |
3.5736±0.4964 |
0.5571±0.0690 |
0.6453±0.0921 |
0.6514±0.0594 |
0.0234±0.0076 |
0.8694±0.0572 |
0.1934±0.0369 |
0.0402±0.0046 |
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